定制合成 Custom synthesis
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虽然多肽生成的氨基酸组成统计分析方式较多,且趋向更机敏、更精准、更简易、更快速,但都还没一种方法可以单独可用所有氨基酸残基的检测,并且很多因素如温度、时间、水解反应试剂、水解反应方法及多肽生成样品中添加剂等对水解程度均有影响。常见的水解反应方法作简单详细介绍下列:
1.酸碱度水解反应
酸碱度水解反应是应用更为广泛水解反应方法,可以使大部分氨基酸残基完全水解反应,最实用性的水解反应剂是6mol/LHCI。
规范:6mol/LHCI、机械泵、110℃.水解反应時间为20-24小时。就可以用于高效液相水解反应方法也能用以高效液相水解反应方法。但在该规范下,天冬酰胺和谷氨酰胺分别被完全水解反应为天冬氨酸和磷酸,磷酸则被完全损坏,胱胺酸最先用二硫代二己酸、4一丁二烯呲啶或碘代甲酸维护保养后水解反应就可以测量,酷氨酸一部分被水解反应液所损坏,丝氨酸和苏氨酸被一部分水解反应。一些脂环族氨基酸残基间的肽键无法裂化,可以依据提升水解反应時间如水解反应92h甚至120h来解决。
2.偏碱水解反应
偏碱水解反应一般采用NaOH和KOH作为水解反应剂。该水解反应方法是HCI水解反应的相辅相成法。因为碱水解反应时,大部分氨基酸遭受损坏或外消旋化,仅磷酸是稳定的。因而 此方式仅限测量磷酸。
3.酶水解反应
用一组蛋白酶水解反应肽链,尤其可用对分析化学水解反应较为敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的测量。水解反应整个过程中氨基酸不造成消旋化,大部分可以维持所有的组成氨基酸不被损坏。但是因为酶水解反应规范温和,对天冬酰胺、谷氨酰胺等皆无损坏功效,且体现必须较长的時间,水解反应不完全,酶本身也是蛋白,对样品的测量结果很有可能会出現危害。
微波辐射能水解反应,一般情况下190℃微波加热水解反应15分钟肽类就可以完全水解反应,导致 完全水解反应的時间大大缩短。在微波加热辅助酸水解反应和微波加热辅助酶水解反应中,水解反应時间可从过去的几十小时减少到几十分钟。
总体来说,多肽生成药物水解反应方式应根据其产品的特点、科学研究目的、可获得的试品量及少实验室的标准采用合适的水解反应方法。
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