多肽合成

上世纪50年代以来，蛋白质磷酸化已被生物学家视为一种动态的生物调控过程，目前，该过程已成为生物界最为广泛和重要的蛋白质翻译后修饰。大约1/3的蛋白质被认为是在细胞内通过磷酸化作用进行了修饰。蛋白磷酸化修饰与DNA损伤修复、转录调节、信号转导和凋亡调控等多个生物学过程密切相关。研究磷酸盐蛋白和多肽有助于阐明上述过程的机制，进一步认识生命活动的本质。近几年来，随着蛋白质组学技术的不断发展，蛋白质磷酸化的研究得到了重视。

蛋白磷酸化在细胞信号转导中的作用磷酸化多肽主要指Ser、Tyr和Thr残基在肽链上的侧链羟基被修饰为酸型磷酸酯多肽。多肽磷酸化是研究蛋白质磷酸化过程的重要手段，因此研究蛋白质和多肽磷酸化反应以及确定简单、成熟的蛋白质磷酸化反应具有重要意义。迄今为止，合成多肽的方法主要有后磷酸盐改性法和单体法两种。后磷酸法是指在树脂上合成完多肽序列后，对其中Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化；单体法是指将受适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中，这比后磷酸法更简单，已成为多肽磷酸化修饰的主要方法。

磷酸化氨基酸在单体法修饰时，由于侧链修饰中较大的基团产生的位阻，使其与肽链发生缩合，且以后氨基酸的引入都很困难，特别是当含有多个磷酸化位点修饰时，合成就变得异常困难，最终产物的成分复杂，分离难度大，收率极低。所以，当肽链中有多个位点的磷酸化时，可以考虑采用后磷酸化的方法，其合成过程主要是在多肽合成结束后，对要标记氨基酸的侧链保护基进行选择性的脱除，而对于Tyr,Thr可直接用侧链不保护的氨基酸进行反应。在1%TFA/DCM条件下，侧链保护基脱除可定量。在后磷酸化过程中，可采用双苄基亚磷酰胺、四唑亚磷酰胺、四唑、联接羟基的活性中间体，在过氧酸条件下进行氧化，生成磷酰胺，完成反应。

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