多肽合成

多肽的溶解和保存方法

建议先用少量肽测试最佳溶解方法，多肽完全溶解后，再加入溶液，稀释到最终浓度。也就是说，先溶解，然后加入缓冲液。注意:总是在适当的溶剂中加入多肽搅拌，不能采用其他方法。冻干多肽的溶解。

多肽溶解中的主要问题是二次结构的形成。

虽然疏水肽链二次结构的形成更加明显，但除了最短肽链，这种现象几乎发生在所有肽链上，与极性无关。因此，溶解多肽的第一个原则是使用无菌蒸馏水或离子水(条件允许时使用无氧水)。

多肽溶液可能会遇到细菌降解。为了避免这种现象的发生，多肽应溶解在无菌蒸馏水中，或用0.45或0.2的滤膜过滤除菌。

包括Cys、Met、Trp的多肽特别容易氧化，应溶解在无氧水中。无氧水可通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气获得。

多肽不溶于纯水时，超声波处理有助于破碎粒子，提高溶解度。注意:超声波处理会导致溶液发热和多肽分解。

多肽中含有多个碱性氨基酸时，使用1~10%乙酸水溶液的疏水性非常强的多肽使用50%乙酸。

多肽中含有大量酸性氨基酸时，可以用1~10%氨溶液或乙酸乙基吗？咖啡或重碳酸盐等挥发性碱性缓冲液溶解。pH值应在分层前调整。

异丙醇和乙腈可溶解中等大小肽。肽上柱时，有机溶剂的量必须少。否则，会严重影响滞留时间。

多肽含Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烃侧链高度疏水，或中性肽时，DMF和DMSO等膜变性剂的使用有助于多肽的溶解。

a.高浓度膜变性剂通过破坏多肽的二次结构帮助溶解。

b.膜变性剂适用于多肽分析液的制备，但可能会干扰其生物活性的研究工作。

c.DMF是最佳变性剂(最高浓度达到30%)，滴下多肽溶解。

d.反相层分析时，DMF与洗脱液的前峰一起流出，根据样品量的多少，峰值可能很高。大多数肽在大量DMF流出后几分钟内流出，肽链小的话，洗脱过早，多肽的量就会下降。冷冻干燥多肽的保存。

所有标明保持冷冻干燥的产物都必须保存在冷冻条件下，最好保存在-20℃以下，保存在-10℃以下，很多肽可以维持几年的活性。

使用冷冻产品时，在打开盖子之前，瓶子和试管必须在装有新鲜干燥剂的干燥箱内升到室温。对于保存在-20℃的产品，这个过程需要一个小时以上，根据包装的大小而不同。否则，瓶子打开时，水分进入，多肽凝缩，稳定性下降。一旦开启，应迅速称重完毕，立即封闭，以免潮解，尤其是亲水肽更应留意。多肽溶液的保存。

多肽溶液比干粉稳定性差得多，为了取得最佳结果，遵循以下原则：

1.反复冻融会损害肽的活性，建议分装成小包保存。解冻需要多少，使用后扔掉剩下的东西。

2.溶于pH5~7无菌缓冲液，储存在-20℃。

3.包括Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽容易氧化，因此必须保存在无氧化剂的环境中。

4.细菌可分解多肽，贮藏前必须过滤除菌。

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