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在大家多肽生产纯化全过程中,常常会遇到难溶的序列 ,这致使了诸多多肽公司多肽生产全过程中成品率低,难纯化 ,制成品纯净度不过关乃至 多肽生产不成功等不良影响 ,这类难可溶与多肽本身的氨基酸构成及序列有密切相关,我们在多肽行业内长期深入的科学研究 ,使我们累积了大量的宝贵工作经验 ,保证我针对难溶肽的溶解纯化维持很高的通过率和产品品质 。
大家针对难溶肽的溶解汇总出以下几点 :
(1)一般整体显酸性的多肽溶解艰难时可以加入适量的碱性溶液,而显碱性的多肽溶解艰难时可以加入适量的酸性溶液;。
(2)序列中包含大量疏水性氨基酸或中性氨基酸时,难以立即溶于水,一般必须先加入小量有机溶液 ,溶解彻底后用纯净水大量稀释液 ,常见的有机溶液有乙腈,DMSO ,DMF,丙醇,等;
(3)当肽链中带有Met或是 Cys时,不能用DMSO 溶解 ,由于DMSO有还原性,这很可能会造成肽链中包含的S被氧化;
(4)专肽专柱:我们在开发设计Amyloid产品系列的环节 中,发觉用DMOS溶解的商品纯化后应用的纯化柱基本上就不可以用以别的商品的纯化 ,为了更好地保证Amyloid商品的平稳 ,大家针对Amyloid等相近商品都适用了专业的纯化柱。
在没有影响您试验要求的情形下,还可以对于肽链的物理特性 ,物理性质和分子式,对多肽开展装饰更改 ,提升其溶解性 ,下列是咱们的建议:
(1)装饰肽链中C端和N端:针对酸性肽,大家强烈推荐C端 乙酰化装饰 ;针对碱性肽,大家强烈推荐N端氨基化装饰 ;
(2)改动肽链中的氨基酸序列:一些序列存有大量的连续的疏水性氨基酸 ,比如W,F,V,I,L,M,Y,这种疏水氨基酸在序列中大量或是连续反复有时,成条肽链一般是难溶的,为了更好地提高肽的正负极和吸水性 ,大家建议客户在没有影响试验结果的基础上,增加序列,或是通过降低疏水性氨基酸的数量来提升溶解性 。
(3)更换序列中疏水性氨基酸的残基 :在没有影响试验结果的基础上,用可溶的氨基酸取代序列中的疏水性氨基酸可以做到提升溶解度的效果 。
大家一般用Gly,Ala来更换疏水性氨基酸 ,一般都能获得比较好的溶解效果 ,这也是一种保守但合理的提高多肽溶解度的方式。
写到最后:
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