多肽合成

一、质谱MS

这里提到的质谱是指一级质谱，多肽质谱鉴定是指使用质谱法鉴定多肽。根据检测多肽的氨基酸序列信息来获取多肽的序列或翻译后的修饰信息，主要是对多肽的一级结构进行鉴定。串联质谱常用于多肽鉴定。从代测样品中提取出多肽以后，先用色谱法分离，然后离子源将分离后的多肽进行离子化，之后一级质谱检测完整多肽离子的质荷比。

二、高效液相色谱(HPLC)

HPLC可以在短时间内分离蛋白质和肽，更重要的是，HPLC可以在制备规模上生产具有生物活性的肽。反相高效液相色谱(RP-HPLC)最常用于多肽的分离、纯化和鉴定，约95%是C18反相硅胶HPLC。其原理是基于多肽的疏水性，使不同的多肽在不同的介质条件下分离，具有快速、高效、高回收的特点，在多肽和蛋白质的分离和制备方面具有独特的优势。

HPLC将在整个过程中进行三次确认，切割后分析MS和HPLC。制备后，HPLC将再次测试并交付给QC测试中心。MS再次确认后，将冻干。冻干后，最后一次测试将在交付前进行。

三、液质联用LC-MS

LC-MS，简称LC-MS，以液相色谱为分离系统，以质谱为检测系统，样品在质谱部分与流动相分离，经离子化后，经质谱的质量分析仪按质量数分离离子片，经检测仪得到质谱图。液相色谱法（LC）能有效地将试样中的有机物中的有机物成分分离出来，而质谱法（MS）能将分离出来的有机物逐一分析分析，从而得到有机物中的分子量、结构（在某种情况下）和浓度（定量分析）的信息。强大的电喷雾电离技术，使LC-MS质谱非常简单，后期数据处理简单。LC-MS是有机分析实验室、药品、食品检验室、生产过程控制、质量检验等部门不可缺少的分析工具。

四、核磁C\H谱

肽核磁性1HNMR和13CNMR谱图是最重要的参数之一。它能提供包括磁性核电子结构信息和磁性核中成键状态信息在内的磁性核类型信息。根据化学位移可以直接判别氢谱中甲基氢、芳氢、烯氢和醛氢等等。有机化合物的基本骨架和结构可以根据化学位移，特别是C化学位移来推导。

五、MALDI-TOF

然而，对于多肽的大分子物质，如ESI，在电离过程中会使大分子离子破碎形成碎片，这是分析的第一步。因此，MALDI-TOF很好地解决了这个问题。它可以更准确地测量多肽大分子物质，而不会产生或减少离子碎片。

其原理：当使用一定强度的激光照射样品和基质形成的共结晶膜时，基质从激光中吸收能量，导致样品分子电离。它是一种软电离技术。

六、肽含量检测（元素分析）

通常根据N元素分析或氨基酸分子来检测肽含量，即目标肽在产品中的净含量。

七、二级质谱测序LC-MS/MS

蛋白先经胰蛋白酶消化成肽段，肽段在质谱仪中离子化后，会携带一定量的电荷，根据检测器分析，可得到各肽段的质荷比（m/z），即一级质谱图；为得到肽段更具体的序列信息，部分肽段再次被破碎和分析，产生二级质谱图。最后，使用质谱检索软件选择相应的蛋白质数据库，对所有质谱数据进行分析，并以评分的形式依次排列所识别的蛋白质。

写到最后:

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