定制合成 Custom synthesis
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当下在多肽试剂,多肽抗体与多肽生物学的研究中,许多的多肽标记及修饰的内容得到了多方面的使用。较为常见的多肽标记及修饰的内容有磷酸化修饰,生物素标记,荧光标记(FAM,FITC)及非放射性核素标记(C13,H2)等。
多肽标记及修饰
磷酸肽合成
磷酸肽在生命过程中发挥了至关重要的作用,在多肽上磷酸化的地方在Ser,Thr,Tyr。现在进行磷酸肽合成时往往采用磷酸化氨基酸,一般使用单苄基磷酸化氨基酸,Tyr也可以直接对磷酸化氨基酸进行使用。然后用HBTU/HOBt/DIEA办法连接磷酸化氨基酸。可是该办法在多磷酸化多肽或长肽的合成时也有弊端,基于连接效率较低,获得的产品纯度也比较低。
合成这种磷酸化多肽采用后磷酸化方法。在多肽合成完成后,将要标记的氨基酸的侧链保护基选择性地脱去。对于Tyr,Thr,反应能够直接使用侧链不保护的氨基酸。
非放射性核素标记
在非放射性核素标记中,鉴于C13,H2放射性小,安全度高,得到了普遍的运用。按照常规的多肽合成办法,较为完全的非放射性标记的氨基酸能够在多肽上直接连接标记好的氨基酸。
荧光标记
荧光标记普遍使用于生物学研究关键因为其没有放射性且操作简便。荧光标记办法和荧光试剂的构造相关联,与接肽反应使用的方法相同,有游离羧基的采用HBTU/HOBt/DIEA办法连接。不过为了防止在切割的过程中被TFA切割掉,必须在连接FITC前,添加一个氨基己酸。
写到最后:
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