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一、怎样溶解多肽
多肽的溶解度在一定程度上依赖于多肽的极性。酸性蛋白溶解于碱性溶液,而碱性蛋白能溶于酸性溶液,含有多种没有电荷的极性氨基酸残基或憎水性氨基酸的疏水性多肽和中性化多肽可以先溶解于少许有机溶剂中,如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇,接着加入水(蒸馏水)稀释。值得注意的是,带有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不可以用DMSO溶解,这是因为DMSO可能会导致侧链氧化。
二、溶解性测试的重要意义
在无法确定某条肽链的溶解度,为了能够避免造成不必要的麻烦。低剂量的进行多肽溶解测验是非常有必要的。在不改变多肽理化特性的基础上,要测验不同类型的溶剂,直至找出最合适的那种。超声处理有利于粉碎颗粒并提高溶解度。(特别注意:超声处理会造成溶液升温和多肽降解,因此时间不宜过长。)
测验多肽溶解度不是毫无依据的任意选择溶剂。多肽序列本身的理化特性是迅速找到适合溶剂的重要依据之一。对于多肽溶剂选取,接下来把固拓生物测验溶解度时经常使用选择根据里的这三种分享给大家。
1、
假如整段肽携带电荷是阳性的,代表该肽是碱性的。可以先试着用蒸馏水来溶解;要是难溶于水,继续试着用少许10%-25%醋酸溶解,倘若还是不成功的情况下,加入一些TFA(10-50微升)来增溶,随后用水稀释至满意浓度。
2、
倘若整段肽携带电荷是阴性的,代表该肽是酸性的。酸性的多肽可以试着用PBS(PH7.4)来溶解,要是不溶的话,加入少许的碱性溶剂,如0.1M的碳酸氢铵,接着加入水稀释至满意浓度。带有游离半胱氨酸的多肽应溶解于脱气的酸性缓冲液中,因为当PH值超过7时,巯基能被快速氧化成二硫化物。
3、
假如整段肽电荷是零,证明肽是中性的。中性肽往往溶于有机溶剂。首先,试着加入少许乙腈、甲醇或异丙醇。相对于极度疏水的多肽,可以使用少许的二甲基亚砜溶解,随后用水稀释至满意浓度。相对于富含自由半胱氨酸的肽,需用到DMF而非DMSO。对具有聚集倾向的肽,可加上6M盐酸胍或8M尿素,接着进行相应的稀释。
写到最后:
杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成业务:药物肽、临床肽、订书肽、淀粉肽、醛肽、环肽、二硫键搭桥多肽、穿膜肽、各种抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶联BSA和KLH抗原肽、各类酸修饰多肽、各种胺类化合物修饰多肽(苯胺、异戊胺、二乙胺)、各类荣光标记(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。
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