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在多肽生产纯化过程中,经常遇到难溶的序列,这也导致了许多多肽企业多肽成产过程中收率低,难纯化,成品纯度不合格或者多肽生产错误等结果,这些难溶性与多肽本身的氨基酸组成及序列有很大关系,我们在多肽领域里长时间深入研究,使我们积累了丰富的优秀经验,确保我们对难溶肽的溶解纯化做到较高的通过率和产品质量。
我们对难溶肽的溶解梳理出以下内容:
(1)一般整体显酸性的多肽溶解困难时需要倒入适量的碱性溶液,而显碱性的多肽溶解困难时需要倒入适量的酸性溶液;。
(2)序列中含有过多疏水性氨基酸或中性氨基酸时,不易立即溶于水,一般需要先倒入少许有机溶剂,溶解充分后用蒸馏水大量稀释,最常用的有机溶剂有乙腈,DMSO,DMF,丙醇,异丙醇等;
(3)当肽链里面含有Met或者Cys时,不可用DMSO溶解,因为DMSO有氧化性,这极可能会致使肽链中所含的S被氧化;
(4)我们在研发Amyloid系列产品环节中,发现用DMOS溶解的产品纯化后所使用的纯化柱就几乎不能用于其他产品的纯化,为了确保Amyloid产品的稳定,我们对Amyloid等相关产品均配用了专用的纯化柱。
在保证实验需求的前提下,也可以根据肽链的物理性质,化学性质和分子结构,对多肽开展修饰调整,提高其溶解性,下述是我们建议:
(1)修饰肽链中C端和N端:针对酸性肽,特别推荐C端乙酰化修饰;针对碱性肽,特别推荐N端氨基化修饰;
(2)更改肽链中的氨基酸序列:一些序列存在许多的连续的疏水性氨基酸,例如W,F,V,I,L,M,Y,这些疏水氨基酸在序列中大量或者不断反复出现时,整个肽链大多是难溶的,为了提高肽的极性和亲水性,一般建议客户在保证实验结果的前提下,延长序列,或通过缩减疏水性氨基酸的数量来提高溶解性。
(3)替换序列中疏水性氨基酸的残基:在保证实验结果的前提下,用可溶性的氨基酸替代序列中的疏水性氨基酸能够达到提升溶解度的作用。我们一般用Gly,Ala来替换疏水性氨基酸,大多都会获得比较不错的溶解效果,其实也是一种保守但有效的加强多肽溶解度的办法。
写到最后:
杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成业务:药物肽、临床肽、订书肽、淀粉肽、醛肽、环肽、二硫键搭桥多肽、穿膜肽、各种抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶联BSA和KLH抗原肽、各类酸修饰多肽、各种胺类化合物修饰多肽(苯胺、异戊胺、二乙胺)、各类荣光标记(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。
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