多肽合成

多肽纯度是多肽总量中的百分比目标序列。因为肽键的形成不是100% 有效性，并非所有肽链都是目标序列。有些链条可能无法完成，或者氨基酸可能无法在某些链条上正确组合。这些删除序列在你的混合物中形成一定比例的肽。为了实现所需目标序列的纯度，我们使用反相高效液相色谱和质谱进行分析和净化肽。

白色多肽粉末经过多肽净化和冻干后，含有一些非多肽成分，如水、吸附溶剂、计数离子和盐。净肽含量包括肽在最终产品中的实际百分比。这个数字不同，从50%到90% 不同的是，这取决于纯度、合成和净化的顺序和方法。在计算生物分析或其他敏感肽实验中的肽溶液浓度时，必须考虑肽含量。溶剂的体积可以通过减轻非肽的重量来确定。例如，当使用1mg成品时，产量为80% 的1mg/ml 当你使用800ull液体时，你将使用800ull液体而不是1000ull液体的溶剂。

肽含量并不代表肽的纯度。这是两种测量方法。纯度由高效液相色谱法测量，表明肽的存在/零污染和不希望。净肽含量仅提供总肽百分比和总非肽成分信息，不同于多肽的出现。通过氨基酸分析或紫外线光度法可以准确测量净肽含量。

根据冻干肽的重量，很难确定具体的肽浓度。冷冻干肽按重量可含10-70% 水和盐。与疏水肽相比，更亲水的肽通常含有更多的水和盐。如果肽在序列中含有发色团，(W 或 Y 残基) ，根据这些残基的消光系数，可以很容易地确定肽浓度。

计算可采用以下步骤:

使用1厘米细胞在中性 pH 下280nm 处发色残基的摩尔消光系数:

色氨酸5560AU/mmol/ml

酪氨酸1200 AU/mmol/ml

氨基酸测序中每个发色团的消光系数一般被认为是相加的，即肽的整体摩尔消光系数取决于这些发色团残基在序列中的类型和数目。

计算: mg 肽/ml = (A280 x DF x MW)/e，其中 A280是溶液在1-cm 细胞中280nm 处的实际吸光度，DF 是稀释因子，MW 是肽的分子量，e 是每个发色团在280nm 处的摩尔消光系数。

假设的例子: 在1-cm 细胞中，具有序列 GRKKRRQRRRPPQQ (MW = 1847)的肽的50X 稀释溶液在280nm 处读取0.5 AU。计算储备肽溶液中的原始肽浓度:

Mg 肽/ml = (0.5 AU x 50 x 1847mg/mmol)/[(1 x 5560) + (2 x 1200)] AU/mmol/ml = 5.8

注意: 任何吸光度计算都假设肽是展开的，发色团暴露在外，通常情况下是短的可溶性肽。如果对肽的溶解度或折叠性有疑问，最好在变性条件下(例如6M GdnHCl 或8M 尿素)进行测量。显然，除非去除变性剂，否则这些肽溶液将变得毫无用处。

如果序列没有色氨酸或酪氨酸，唯一可行的选择是做氨基酸分析。

写到最后:

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